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12-9
TOP-10電擊感受態細胞只能用于電擊轉化,不能用于熱激轉化。TOP-10來源于MC1061菌株,是目前實驗室常用的感受態細胞之一,基因型與DH10B高度類似(DH10B為galE15型,而TOP-10為galU型)。操作說明:一、0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。二、取-80℃保存的TOP-10電擊感受...
11-12
質粒pYES2的篩選標志為URA,可用SD-URA板板進行篩選。BY4742感受態細胞經特殊工藝制作,pYES2質粒檢測轉化效率104cfu/μgDNA。操作說明:1、取一支無菌的1.5mlEP管,依次加入預冷的目的質粒1-3µg,CarrierDNA10µl(95-100度5min快速冰浴,重復一次),100µl冰上融化的AH109感受態細胞,PEG/LiAc500µl,輕輕翻轉混勻6-8次;2、30℃水浴30min,每10m...
11-6
酵母感受態細胞是指通過物理或化學方法處理,使其在短時間內能夠吸收外源DNA分子(如質粒或基因片段)的酵母細胞。這些細胞通常處于一種“非自然”狀態,能夠克服正常細胞膜的屏障,將外源DNA成功引入。廣泛應用于基因克隆、蛋白表達、基因編輯、基因敲除等分子生物學實驗。由于其在細胞工程中的重要性,如何有效地保存這些感受態細胞以保證其長期的穩定性和高效性,成為了研究人員關注的重要問題。保存方法主要分為兩類:冷凍保存法和液氮保存法。這兩種方法在不同的研究環境下有各自的優缺點。以下是常見的保...
10-25
細胞培養技術廣泛應用于生物醫學研究、藥物開發和生物制品生產中。然而,細菌和真菌的污染是細胞培養過程中的一大挑戰,可能導致實驗結果失真、細胞生長受阻,甚至導致實驗的失敗。本文將探討如何有效預防和處理Hyclone細胞培養基使用過程中可能出現的細菌和真菌污染。一、細胞培養污染的來源1.外部環境:實驗室空氣中存在的微生物、灰塵、化學物質等都可能成為污染源。2.操作人員:操作人員的手部、衣物和呼吸中可能攜帶細菌和真菌,直接影響培養基和細胞的安全性。3.設備和耗材:細胞培養器皿、移液器...
10-15
Biospec玻璃珠在生物科學研究中被廣泛使用,尤其是在樣本處理、細胞破碎及其他實驗應用中。為了確保其性能,正確的儲存方式至關重要。儲存環境:1.溫度控制室溫儲存:一般而言,可以在室溫下儲存。避免低溫:盡量避免置于冰箱或冷凍柜內,因為低溫可能導致物理性質變化。2.濕度控制干燥環境:應將儲存在干燥的地方,過高的濕度會導致吸濕和污染。防潮措施:可使用干燥劑(如硅膠包)放在儲存容器內,以保持環境干燥。容器選擇:1.儲存容器的材質選擇合適的容器:推薦使用干凈的塑料或玻璃容器。避免使用...
10-12
培養基是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。基本配置:1.配料配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2.溶解淀粉溶解:少量冷水調成糊狀。加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3.調PH用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。4.過濾濾紙或棉花進行過濾。(有時可以...
9-23
樣本密度分離液是根據物質在液體中的密度差異進行分離的一種液體。其基本原理是利用不同組分在液體中的浮力差異,使得密度較低的組分漂浮在液體表面,而密度較高的組分則沉入液體底部。這種方法常用于細胞分離、微生物培養、粒子分離等應用。作為一種有效的分離工具,廣泛應用于細胞、顆粒和其他樣本的分離。使用步驟如下:1、準備工作在使用之前,需要進行充分的準備工作:.選擇適當的分離液:根據樣本的性質(如細胞類型、顆粒大小等)選擇合適的密度分離液。.設備準備:確保離心機、試管和其他實驗器材清潔、干...
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